Dalam bidang penyelidikan dan pembangunan peptida, kesucian peptida katalog adalah sangat penting. Sebagai pembekal peptida katalog yang berdedikasi, kami memahami kepentingan menyediakan produk berkualiti tinggi kepada pelanggan kami. Kadang -kadang, walaupun usaha terbaik kami dalam proses sintesis dan pemurnian awal, mungkin ada keperluan untuk pemurnian lebih lanjut mengenai peptida katalog. Dalam blog ini, kami akan meneroka pelbagai kaedah dan pertimbangan untuk memurnikan peptida katalog lagi apabila diperlukan.
Mengapa penyucian lebih lanjut?
Terdapat beberapa sebab mengapa pemurnian lebih lanjut mengenai peptida katalog mungkin diperlukan. Pertama, dalam aplikasi penyelidikan yang sangat sensitif seperti ujian berasaskan sel, dalam kajian vivo, atau penyelidikan biologi struktur, walaupun jumlah kekotoran dapat memberi kesan yang signifikan terhadap hasil eksperimen. Kekotoran berpotensi mengganggu aktiviti biologi peptida, yang membawa kepada positif atau negatif palsu.
Kedua, keperluan pengawalseliaan dalam sesetengah industri, seperti farmaseutikal, menuntut tahap kesucian yang sangat tinggi untuk peptida yang digunakan dalam pembangunan dadah. Sekiranya peptida dianggap sebagai agen terapeutik yang berpotensi, sebarang kekotoran boleh menimbulkan risiko kepada keselamatan pesakit, dan oleh itu, langkah -langkah pemurnian tambahan adalah penting.
Kaedah kromatografi
Tinggi - Fasa Tinggi - Kromatografi Cecair Prestasi (RP - HPLC)
RP - HPLC adalah salah satu kaedah yang paling banyak digunakan untuk penyucian peptida. Ia memisahkan peptida berdasarkan hidrofobisiti mereka. Fasa pegun dalam RP - HPLC adalah bahan hidrofobik, biasanya lajur berasaskan silika dengan rantai alkil yang dilampirkan (misalnya, C18 atau C8). Peptida dengan hidrofobisiti yang berbeza akan berinteraksi secara berbeza dengan fasa pegun, mengakibatkan masa pengekalan yang berbeza.
Untuk memurnikan lagi peptida katalog menggunakan RP - HPLC, kita perlu memilih fasa mudah alih yang sesuai. Fasa mudah alih yang biasa terdiri daripada campuran air dan pelarut organik seperti asetonitril atau metanol, dengan penambahan sedikit asid (contohnya, asid trifluoroasetik, TFA) untuk meningkatkan bentuk puncak. Dengan menyesuaikan kecerunan pelarut organik, kita dapat mengoptimumkan pemisahan peptida sasaran dari kekotoran.
Contohnya, jika kita mempunyai peptida katalog sepertiLL-37, peptida antimikrob, yang merupakan peptida antimikrobial dengan aplikasi terapeutik yang berpotensi, RP - HPLC boleh digunakan untuk menghapuskan sintesis yang tersisa oleh produk atau serpihan yang terdegradasi. LL yang disucikan - kemudian boleh digunakan dalam ujian aktiviti antimikrobial yang lebih tepat.
Ion - Kromatografi pertukaran
Ion - Kromatografi pertukaran memisahkan peptida berdasarkan caj mereka. Terdapat dua jenis utama: kation - kromatografi pertukaran (CEX) dan anion - kromatografi pertukaran (AEX). Di CEX, fasa pegun mempunyai kumpulan yang dikenakan negatif, dan peptida dengan caj positif bersih akan mengikatnya. Dalam AEX, fasa pegun secara positif dicas, dan peptida yang dikenakan negatif akan dikekalkan.
Pilihan antara CEX dan AEX bergantung kepada titik isoelektrik (PI) peptida. Jika PI peptida berada di bawah pH fasa mudah alih, peptida akan mempunyai caj negatif bersih dan AEX boleh digunakan. Sebaliknya, jika PI berada di atas pH fasa mudah alih, CEX lebih sesuai.
Contohnya,Ureistachykinin II, peptida dengan profil caj tertentu, boleh disucikan lagi menggunakan kromatografi pertukaran ion. Dengan berhati -hati memilih pH fasa mudah alih dan kekuatan ionik, kita dapat mencapai pemisahan yang baik dari peptida sasaran dari kekotoran lain yang dikenakan.
Kaedah elektroforetik
Sodium dodecyl sulfat - Elektroforesis gel polyacrylamide (SDS - Page)
Walaupun SDS - halaman terutamanya digunakan untuk analisis protein, ia juga boleh digunakan untuk pemurnian peptida sedikit sebanyak. Dalam SDS - Page, peptida disenaraikan oleh SDS dan dipisahkan berdasarkan berat molekul mereka. Peptida berhijrah melalui gel polyacrylamide di bawah pengaruh medan elektrik.
Selepas elektroforesis, gel boleh diwarnai untuk memvisualisasikan peptida. Band yang sepadan dengan peptida sasaran kemudiannya boleh dikeluarkan dari gel, dan peptida dapat dielakkan dari matriks gel. Walau bagaimanapun, kaedah ini mempunyai beberapa batasan. Proses elusi boleh menjadi rumit, dan mungkin terdapat beberapa kehilangan peptida semasa pembersihan. Juga, SD boleh menjadi sukar untuk dikeluarkan sepenuhnya dari peptida yang disucikan.
Elektroforesis kapilari (CE)
Elektroforesis kapilari adalah teknik pemisahan yang kuat untuk peptida. Ia menawarkan kecekapan pemisahan yang tinggi, masa analisis pendek, dan penggunaan sampel yang rendah. CE memisahkan peptida berdasarkan caj mereka - kepada - nisbah massa. Terdapat mod yang berbeza dari CE, seperti elektroforesis zon kapilari (CZE), elektroforesis gel kapilari (CGE), dan kromatografi elektrokinetik micellar (MEKC).
CZE adalah mod yang paling biasa digunakan untuk analisis peptida dan pembersihan. Di CZE, peptida dipisahkan dalam penampan - kapilari yang diisi di bawah medan elektrik. Pemisahan ini berdasarkan perbezaan dalam mobiliti elektroforetik peptida. CE boleh digabungkan dengan pelbagai kaedah pengesanan, seperti penyerapan UV, pendarfluor, dan spektrometri massa, untuk meningkatkan ketepatan pengenalan peptida dan pembersihan.
Pertimbangan lain
Kelarutan
Kelarutan peptida adalah faktor penting dalam proses pembersihan. Sekiranya peptida mempunyai kelarutan yang lemah dalam pelarut pemurnian, ia boleh menyebabkan hujan semasa pemurnian, yang akan menjejaskan pemulihan dan kesucian peptida. Untuk meningkatkan kelarutan peptida, kita boleh menyesuaikan pH pelarut, menambah pelarut Co, atau menggunakan ejen solubilizing tertentu.
Analisis kesucian
Selepas pembersihan selanjutnya, adalah penting untuk menganalisis kesucian peptida. Kaedah umum untuk analisis kesucian termasuk kromatografi cecair prestasi tinggi (HPLC), spektrometri massa (MS), dan resonans magnetik nuklear (NMR). HPLC boleh memberikan maklumat mengenai kesucian kromatografi peptida, sementara MS dapat mengesahkan berat molekul peptida dan mengesan sebarang kekotoran dengan massa yang berbeza. NMR boleh digunakan untuk menentukan struktur dan kesucian peptida pada tahap atom.
Kesimpulan
Sebagai pembekal peptida katalog, kami komited untuk menyediakan peptida berkualiti tinggi kepada pelanggan kami. Apabila pemurnian lebih lanjut mengenai peptida katalog diperlukan, kami mempunyai pelbagai kaedah yang kami pelupusan, termasuk kaedah kromatografi, kaedah elektroforetik, dan pertimbangan lain seperti kelarutan dan analisis kesucian. Dengan berhati -hati memilih kaedah pemurnian yang sesuai dan mengoptimumkan keadaan pemurnian, kami dapat memastikan bahawa peptida memenuhi keperluan kemurnian yang tinggi dari pelanggan kami.
Sekiranya anda mempunyai sebarang keperluan untuk peptida katalog atau memerlukan perkhidmatan pembersihan lanjut, sila hubungi kami untuk perolehan dan perbincangan. Kami berharap dapat bekerjasama dengan anda untuk memenuhi keperluan penyelidikan dan pembangunan peptida anda.
Rujukan
- Snyder, LR, Kirkland, JJ, & Dolan, JW (2010). Pengenalan kepada kromatografi cecair moden. Wiley.
- Jorgenson, JW, & Lukacs, KD (1981). Elektroforesis zon kapilari. Kimia Analisis, 53 (8), 1298 - 1302.
- Laemmli, UK (1970). Pembelahan protein struktur semasa perhimpunan kepala bacteriophage T4. Alam, 227 (5259), 680 - 685.